前言
肺间质纤维化(pulmonary interstitial fibrosis)是以弥漫性肺泡炎和肺泡结构杂乱最终导致肺间质纤维化为特征的疾病 ，凭证病因一样平常分为特发性和继发性两类。弥漫性肺间质纤维化是由多种缘故原由引起的肺间质的炎症性疾病 ，病变主要累及肺间质 ，也可累及肺泡上皮细胞及肺血管。病因有的明确 ，有的未明。明确的病因有吸入无机粉尘如石棉、煤；有机粉尘如霉草尘、棉尘；气体如烟尘、二氧化硫等；病毒、细菌、真菌、寄生虫熏染；药物影响及放射性损伤。因此 ，建设稳固而可靠的肺间质纤维化动物模子是探索其发病机制和开发有用治疗药物的主要包管。现在 ，肺纤维化动物模子所接纳的动物主要是啮齿类动物 ，如小鼠、大鼠、地鼠、家兔等 ，也有选用较概略型的犬、猫、羊、猪等。
部分造模要领
使用动物：大鼠、小鼠、山羊
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博来霉素(bleomycin)是一种多肽类抗肿瘤药物 ，其导致肺间质纤维化的机制主要是通过活性氧的作用。在博来霉素致肺损伤的早期 ， 即肺泡炎阶段 ，爆发大宗氧自由基 ，对肺造成损伤。
【造模要领】：
大鼠：选用体重170~200g的Sprague Dawley大鼠。博来霉素(30mg/支） ，用0.9％氯化钠稀释成4g/L ，气管内滴入博来霉素溶液0.25~0.3ml (5mg/kg) ，可建设肺间质纤维化模子。以2％戊巴比妥钠(40mg/200g ，即0.25ml/只）腹腔麻醉大鼠 ，约3~5分钟后 ，大鼠进入麻醉缓慢状态（如麻醉不深 ，须用乙醚增强）。麻醉后将其仰卧牢靠于鼠板 ，将四肢和头部牢靠 ，剪去颈毛。用聚维碘（碘伏）消毒皮肤 ， 在无菌操作下切开长约1cm的颈中切口 ，逐层疏散袒露气管（若室温低 ，须用保温步伐）。用弯尖眼科钳经气管下方穿过 ，稍微抬起气管 ，只管接过气管分叉处 ，抬高鼠板头端 ，使与桌面成30°~35°。选择1个7号的注射用针头 ，将针头用砂片磨成弧形使其变得圆钝。在进针前用注射器试通注射针头 ，阻止梗塞。进针时与水平面成150° ，在两个环状软骨之间刺入。针孔偏向面向术者 ，有落空感证实已刺进1~1.5cm ，约到气管分叉处阻止进针后注入博来霉素。注入博来霉素0.2ml（约4mg/kg) ，再向气管内注入0.2ml的空气2~3次 ，使药物在肺部散布 匀称。以大鼠身体长轴为中心 ，正反快速旋转鼠板1~2分钟。缝合皮肤 ，局部聚维酮碘消毒（或用青霉素消毒）避免熏染 ，室温坚持在24~25℃ ，待动物自然苏醒后置笼内通例饲养。
小鼠：选用体重18~20g的雄性昆明小鼠。氯胺酮(100mg/2ml)腹腔注射(10mg/100g) ，将实验动物麻醉后仰卧 ，纵行切开皮肤 ，钝性疏散袒露气管 ，用4号针头刺入气管 ，只管靠近气管分叉处 ，将0.05ml博来霉素缓慢滴入（博来霉素每支8mg ，用前以心理盐水配制成0.2％药液） ，连忙将动物直立旋转 ，使药液在肺内匀称漫衍 ，然后缝合皮肤 ，局部乙醇消毒避免熏染。同样 ，也可选用雌性BLAB/C小鼠 ，将小鼠腹腔注射水合氯醛麻醉后牢靠于操作台 ，以动物喉镜压下小鼠舌根袒露声门 ，雾化器从声门插入气管并雾化注入博来霉素溶液100µl (5mg/kg)。
山羊：选用12~15kg的山羊 ，3％戊巴比妥钠麻醉下通过球囊导管选择性地向左肺下叶支气管缓慢滴入博来霉素1.5~3.0U/kg ，滴入液体总量按2~3ml/kg给予 ，滴注完毕后 ，将山羊左侧卧位30分钟 ，以利于药物的吸收和匀称漫衍 ，复制成肺间质纤维化模子。
【造模特点】：
大鼠模子病理组织学与病理心理学改变与人类肺间质纤维化相似。其病变早期体现为渗透性肺泡炎 ，炎症细胞在病变处群集增多。晚期为肺间质纤维化 ，间质细胞增生 ，基质胶原群集取代正常的肺组织结构。注入博来霉素2周时 ，可见肺系数（肺重／体重×100％）、羟脯氨酸含量显着升高。显微镜下可见普遍炎症细胞浸润 ，以淋巴细胞、单核吞噬细胞为主 ，并有肺泡壁增厚、成纤维细胞增生等Ⅱ级肺泡炎体现。第4周可见肺间质内有大宗散在绿染的胶原纤维 ，肺泡结构破损 ，见有许多纤维细胞等Ⅲ级肺间质纤维化病变。
小鼠使用博来霉素后15天 ，病变弥漫 ，但以肺泡距离、血管和小气管周围显著。病变处肺泡壁增厚 ，毛细血管扩张 ，肺泡腔变小 ，其中充满大宗的中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞等炎症细胞。在气管、血管周围及近胸膜处泛起以中性粒细胞、单核细胞为主的炎症细胞浸润 ，呈3级肺泡炎性改变。30天后病变弥漫 ，病变处肺泡壁增厚 ，肺泡距离增宽。在气管和血管周围及近胸膜处肺组织可见以单核细胞和淋巴细胞为主的炎症细胞浸润 ，胸膜增厚 ，并可见较显着的成纤维细胞和胶原纤维的增生和集聚。主要呈1级纤维化改变。
经典的复制肺纤维化小鼠模子要领是气管内滴入博来霉素溶液。气管内滴入或雾化博来霉素均能引起显着的肺组织损伤与肺纤维化改变。单次气管内滴入博来霉素即可引起显着的肺纤维化 ，但病灶漫衍欠匀称 ，不可准确地模拟人类原发性肺纤维化病变的弥漫性漫衍。气管内雾化给药方法能使博来霉素更匀称地漫衍于肺内 ，纤维化改变换弥散 ，更靠近人类肺纤维化改变。气管内雾化博来霉素溶液不需穿刺气管 ，镌汰了动物的损伤与痛苦 ，可作为复制肺纤维化小鼠模子的优选计划。
山羊使用博来霉素第3~4天 ，在中央小叶泛起斑片影和粗线条。在第1周末 ，上述区域变大、融 合 ，抵达胸膜下区域。肺泡和间质内可见到渗透物。第2~3周 ，主要体现为毛玻璃样病灶和微细的放射性线条 ，位于中央小叶和气管血管制周围 ，没有小叶距离增厚的征象。第4周 ，显示了肺间质的异常。肺标本的概略视察显示呈灰色 ，组织学检查了CT显示的异常区域 ，效果显示主要病变在气管周围 ，肺段以下肺小叶周围病变疏散。1周内主要是肺细胞化生 ，伴有肺泡壁破损、炎症细胞浸润 ，第2周以后 ，主要是间质内成纤维细胞群集 ，伴有胶原纤维增添。第3周后 ，肺泡距离增厚。
【模子评估和应用】：
现在用于该模子制作的诱导剂许多 ，如其中以博来霉素最为常用。博来霉素气管内一次性注入可复制出与人类肺间质纤维化病理历程相似的动物模子 ，可全身给药 ，也可局部给药 ，可一次性给药或分多次给药 ，也可接纳微型药物泵一连给药。详细要领如下：①气管内给药：是现在较为常用的给药途径 ，是一种局部给药要领 ，将诱导剂直接注入动物气管 ，造成肺部的病变 ，可以是一次性的 ，也可以是重复多次的。关于博来霉素的水溶液 ，多接纳的是经气管滴注法。该法虽操作简朴、本钱低 ，但病变规模较局限 ，与人类病变的弥漫性漫衍有差别 ，因此接纳雾化吸入给药 ，战胜了前者的误差 ，使病灶漫衍匀称弥散。②腹腔内给药：是一种全身给药的要领 ，将诱导剂（如博来霉素）注入动物的腹腔内 ，进而施展致纤维化作用。一样平常是多次给药 ，有逐日一连给药的 ，也有距离几日给药的。当药物在体内累积抵达一定量时 ，即可建设动物模子。但与气管内给药相比 ，所致病变部位胸膜、支气管周围均较量重 ，此后者所致病变以支气管周围显着 ，胸膜不显着 ，这与人类的肺间质纤维化的病变（病变先由胸膜最先）不太相符 ，故以为该法优于后者。但与后者相比 ，因所需药物量过多 ，其用度也高 ，使其在海内的应用受到了一定的限制。
本模子为研究肺间质纤维化的病因、发病机制及防治提供了一种新的实验研究手段 ，可以在严酷控制种种条件下视察肺间质纤维化的爆发、生长和疾病转归以及这些差别改变在病理形态学、分子生物学以及影像学上的体现等纪律 ，提高对肺间质性疾病的熟悉水平。
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