前言
结核病(tuberculosis，TB)是一种严重危害人类康健的慢性熏染病，现在全球有约20亿人被熏染，每年新泛起结核病患者约800万～1000万，每年因结核病殒命人数约为200万～300万 。TB是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的呼吸道熏染性疾病，可累及全身多器官系统，最常见的患病部位是肺脏，占各器官TB总数的80%~90%，也可以累及肝、肾、脑、淋投合等器官 。MTB主要通过呼吸道撒播 �Ｔ硕诜谓岷嘶颊叩奶狄焊稍锖�，细菌随灰尘飞扬，被他人吸入也可引起熏染，人体吸入含有MTB的飞沫是否患病主要由吸入结核菌的数目、毒力、人体的对抗力等多种因素有关 。
TB动物模子的制备和应用可以获得TB爆发和生长中的一些特征，如TB熏染后引起的免疫应答以及对病原的相关研究 。别的，标准化的动物模子还可应用于新研制疫苗的评价以及视察新药物对TB的治疗效果 。凭证动物模子泉源和应用规模，MTB动物模子可分为潜在熏染动物模子和急性熏染动物模子两大类 。
部分造模要领
使用动物：小鼠、大鼠、豚鼠
【造�；啤浚�
MTB熏染可引起运动性TB及潜在熏染等 。选择差别品系的动物、结核菌量的几多以及差别熏染途径都可引起模子的差别 。使用高剂量的强毒株对敏感动物举行攻毒，一样平常可建设结核病的急性熏染模子 。小鼠因其对MTB高度敏感：遗传配景清晰、检测试剂容易获得、成内情对较低且具备较量成熟的基因定向敲除手艺等特点，成为最常用的MTB熏染的动物模子 。差别品系动物遗传特征的差别，小鼠对MTB的敏感性也不相同，NIH小鼠和BALB/c小鼠对MTB不敏感；615和TA1小鼠的性别差别大；ICR、TA2和DBA/2小鼠虽然对MTB较敏感，但每克脏器含菌最显著低于C57BL/6和昆明鼠 。C57BL/6小鼠对MTB熏染最敏感，较为常用 。
【造模要领】：
小鼠：差别品系小鼠由于其遗传特征的差别，其对结核分枝杆菌H37Rv株敏感性也差别 。如BALB/c和C57BL/6小鼠对H37Rv敏感性是DBA/2和C3H/HeJ小鼠的2倍，现在常用BALB/c和C57BL/6小鼠复制MTB熏染模子 。小鼠尾静脉接种1×106CFU H37Rv标准毒株，2周后即可泛起体重下降，状态萎靡，剖检发明肺部有显着的肉芽肿形成（图6-1A/文末彩图6-1A)，H&E染色后发明肉芽肿组织由大宗上皮细胞和淋巴细胞组成，部分肺组织坏死，红细胞渗透显着，大宗淋巴细胞和泡沫细胞群集在支气管及血管周围（图6-1B/文末彩图6-1B) 。小鼠脾、肺脏器研磨举行CFU计数能获得较高的荷菌数 。为了更好地模拟MTB的熏染途径，也有接纳气雾爆发器通过呼吸道熏染 。雾化熏染实验的最适条件为5ml雾化液（细菌＋心理盐水）雾化90分钟，雾化吸入MTB数以106CFU为最佳，小鼠可泛起显着的结核肉芽肿病变，部分泛起坏死性改变 。
大鼠：大鼠因具有价钱低廉、对抗力强、血标本容易收罗等优点，比小鼠更相宜实验中多次采血 。常用的大鼠品系有Sprague Dawley大鼠、Wistar大鼠等 。以H37Rv毒株为例，大鼠肺脏熏染以尾静脉接种107CFU为宜，肝脏熏染以尾静脉接种108CFU为宜；脾脏熏染以尾静脉接种107CFU为宜，如接纳腹腔接种则需活菌数抵达108CFU 。与小鼠类似，大鼠模子同样不可模拟人的肺部病理改变，不泛起常见于人的干酪样坏死、纤维化、钙化以及朴陋 。
豚鼠：豚鼠被普遍应用于MTB熏染研究，结核病理改变与人体相似，尤以结核肉芽肿结构典范，细菌含量较低，可生长为坏死，是现在国际公认的TB模子最适动物 。豚鼠熏染途径多接纳腹腔注射、腹股沟或大腿内侧皮下注射、前肢皮下静脉注射等途径，但以气溶胶吸入熏染方法最能模拟MTB自然熏染历程 。豚鼠腹股沟或大腿内侧皮下注射使用H37Rv菌量为0.3ml（含湿菌重0.3mg) 。与其他MTB敏感动物相比，豚鼠未建设近交系，并缺乏举行免疫学剖析的试剂，使其应用受到较大限制 。低剂量差别的MTB毒株气溶胶熏染豚鼠，发明Erdman K01、CSU93/CDC1551和HN878系MTB毒株和实验室常用H37Rv毒株相比，豚鼠的存活时间更短 。熏染30天后，MTB逐渐从肺部弥散到支气管周淋投合、胰周淋投合、脾、肝、胰、肾上腺和心脏 。
非人灵长类：模拟人TB的最理想模子就是非人灵长类动物模子 。这类模子对MTB通过自然途径熏染相当敏感，可生长为与人相似的疾病，包括临床体现、组织病理转变等方面 。同时，此类模子能够诱发抗原特异性T细胞反应，可被卡介苗(BCG)疫苗�；� 。最常用的非人灵长类动物模子是短尾猴和猕猴 。短尾猴用BCG免疫后险些可以完全对抗MTB熏染引起的病理损伤，与未免疫动物相比大大镌汰肺组织中的荷菌盘 。相反，猕猴用BCG免疫后，可爆发严重的肺组织病理损伤，形成朴陋、干酪样坏死，与未免疫动物相比肺中的病灶险些不减 。与人相似，只有少数动物会发病，大大都进入潜在熏染状态 。如用高菌量(1× 104~1×105 CFU) 的H37Rv经气管内熏染食蟹猴，可制备急性高致死率的多肺叶TB模子 。用中等菌量(1×103CFU)接种动物可制备成有临床症状、慢性运动、肉眼可见肺病灶、脑膜炎症状的TB模子 。与小鼠和豚鼠熏染模子相比，非人灵长类的熏染模子更适合现在的研究 。
【造模特点】：
急性熏染发病快、病程短、病情重，具有较高的殒命率 。MTB急性熏染模子通常是接纳大剂量MTB攻击造成动物机体组织的渗透坏死或增生 。凭证机体的免疫反应和失常反应性、菌量、毒力及组织特征的差别，泛起差别的干酪样坏死及渗透为主的病理转变 。这些病理转变爆发和生长较快，如未接纳转归步伐，将直接导致动物的殒命 。
【模子评估和应用】：
海内对MTB熏染动物造模乐成的评判指标尚无统一之标准 。大都以靶器官组织匀浆作育为主要认定要领，辅之以组织病理视察和脏重视量指数测定，间或使用结核菌素试验及组织标本抗酸染色等要领 。
1.靶器官组织匀浆作育 颈椎脱臼法正法动物，无菌疏散脾脏、肺脏等靶器官 。将组织使用200目滤网研磨过滤 。取l00µl悬液稀释至所需浓度梯度，划分从各梯度中取100µl接种到作育基，置37°C作育箱，3～4周后计菌落数 。
2.病理组织视察 病理切片如视察到较多的结核结节或干酪样坏死及液化灶等典范结核病变可作为造模乐成的直接认定要领 。但大大都啮齿类动物均缺乏典范病理改变，故常须团结细菌学抗酸染色加以确定 。因此，组织病理阳性加上抗酸染色阳性成为最客观、最直接的乐成模子确定要领 。
3.脏重视量指数测定 动物主要脏重视量及脏器指数是药物慢性实验检测的项目，凭证脏重视量盘算脏器指数可以判断内脏器官病变的性子和水平 。当某脏器受结核分枝杆菌H37Rv熏染后，该脏器便会增大增重，用脏器的重量与动物体重的值体现熏染脏器的病变水平，即脏重视量指数，该指数愈大，则体现病变水平愈重 。盘算要领：脏重视量指数＝脏重视量（g)/体重(g)×100% 。实验动物脏重视量脏器指数是动物实验中常用的主要基础数据，也是MTB熏染模子判别的最常用指标 。
参考文献：
1.师长宏，徐志凯，范雄林．结核分枝杆菌熏染的动物模子．外洋医学（微生物学分册），2004,27 (4):31-34
2.山河，朱道银．结核分枝杆菌潜在性熏染爆发气制的研究希望. 外洋医学（微生物学分册），2003, 26 (1):31-33
3.侯江厚，李琦，陆宇，等．免疫制剂辅助治疗耐多药结核分枝杆菌熏染动物模子的起源研究．中华结核和呼吸杂志，2012, 35 (12):911-914
4.Ahmad Z, Fraig MM, Pinn M L, el al. Effectiveness of tuberculosis chemotherapy correlales with resistance lo Mycobacterium tuberculosis infection in animal models. J Antimicrob Chemother,2011,66(7): 1560-1566
5.Converse PJ, Karakousis PC, K血kenberg LG,et al. Role of Lhe dosR-dosS two-componenl regulatory system in Mycobaclerium Luberculosis virulence in Lhree animal models. Infect Immun, 2009,77 (3):1230-] 237
6.Hu Y, Henderson B, Lund P A, et al. A Mycobacterium tuberculosis mulant lacking the groEL homologue cpn60. I is viable bul fails to induce an inflammatory response in animal models of infection. Infect lmmun, 2008, 76 (4):1535-154
7.Rivas-Santiago B, Castaneda-Delgado JE，Rivas Santiago CE,el al. Ability of innate defence regulator peptides IDR-1002, IDR-HH2 and lDR-1018 Lo prolect againsl Mycobaclerium tuberculosis infections in animal models. PLoS One,2013,8 (3):e59 119
