1、病理样本生涯要领
牢靠法:
(1)浸入法
从人体或动物取下的小块组织,连忙置入液态牢靠剂中举行牢靠,这是最常用的要领。通常标本与牢靠液的比例为1:10~1:20,但组织块不宜过大过厚,不然牢靠液不可迅速渗透,条件允允许2h以内需替换一次牢靠液。
(2)灌注法
组织块体积大或牢靠液极难渗入内部,可将牢靠液全心脏灌入,经血管分支抵达整个组织和全身,从而充分牢靠。该法普遍应用于脑部疾病的科学研究。使用自然血管网,快速、匀称地生涯标本,以坚持标本类似活体状态、只管坚持抗原性。
冻存法:
冰冻样本能够较好的生涯组织的抗原免疫活性,其制作历程较石蜡切片快捷、轻盈,弱点是细胞内易形成冰晶而破损细胞结构,组织形态不完整,倒运于诊断;
① 动物组织需尽快取材生涯,取材应在冰上举行,取材后组织专心理盐水冲洗清洁,去除血渍和污物,并剔除非研究所需的组织;
② 吸干水渍并切小块,放入已标记的生涯容器中,液氮速冻后,转运至-80℃冰箱生涯,运输时请使用概略积干冰运输。
通例组织剖解取材牢靠注重事项:
① 取材手法:要求剖解器械尖锐,尽可能选择薄且尖锐的手术刀片,镌汰铰剪的使用,阻止挤压挫伤标本外貌。较准确地取到目的部位组织,夹取标本的时间只管远离目的区域组织。
② 取材速率:只管包管样本离体后1min内放入到合适的牢靠液内。若是一只动物同时取多种器官,优先作废化器官,其次取中枢神经系统器官(脑,脊髓等),皮肤、肌肉等可放到最后取。
③ 组织块大。未经灌注的标本组织厚度不要凌驾1cm,由于牢靠液的渗透作用有限。
④ 牢靠液:针对差别的标本特点及实验目的一定要选用准确的牢靠液。
⑤ 牢靠液量:牢靠液体积为组织的10-20倍,组织能在容器内自由移动,不贴壁不沉底,做好清晰标记。
⑥ 牢靠温度:常温即可,无需冷藏,切勿冷冻结冰,不然牢靠液结冰形成冰晶严重破损组织形态结构。
⑦ 在PBS或者心理盐水中缓慢冲洗,去除血液,用滤纸吸干水分,坚持牢靠液不污浊。
⑧ 单独的小组织(如类器官软骨球)需直径抵达1.5mm才华举行检测,包裹在水凝胶内里的类器官需做标记(可用标记品红),以便后期切片能够定位组织位置。
常用实验动物(巨细鼠、实验兔等)的各脏器取材要领(参考)
注:当组织块不凌驾2.0cm×2.0cm×0.5cm时,推荐整体取材牢靠;如大动物相关脏器或组织过大,可参考以下要领
系统名称 |
组织部位 |
取材要领(参考) |
消化系统 |
胃 |
无特殊指准时,选取纵向笔直于胃壁取一长条切片(同时切到胃粘膜和肌层),注意整理清洁胃组织内容物 |
肠 |
可选横切圆环状、或纵切长条状,肌层容易脱落,取材时应行动轻缓,用PBS或生理盐水缓慢冲洗肠道内部,祛除肠道内容物,坚持牢靠液不污浊,不宜太短(2cm左右),太短容易造成后期切片肠道肌层不完整 |
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肝 |
每页肝脏剖开牢靠(使用手术刀),可取叶肝切最大面,叶肝横切看月牙状,及其他肉眼可见的病变或者突起。若肉眼不可见,建议距离多做切片,以便后期诊断 |
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胰腺 |
整体取材,巨细不凌驾2.0cm×2.0cm×0.5cm |
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呼吸系统 |
肺脏 |
大鼠可取一叶横切肺,小鼠可取单唯一叶肺(左肺)或五叶整肺(尽可能全肺包埋 ),若有病变可取病健接壤的位置 |
气管 |
气管恣意一段1.0-2.0cm,大动物不凌驾2.0cm×2.0cm×全层 |
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泌尿系统 |
肾脏 |
剖开牢靠(使用手术刀),纵切选冠状蚕豆状最大面,横切取扇形最大面 |
膀胱 |
小动物整体取材,或取包括全层结构的膀胱组织一块,巨细不凌驾2.0cm×2.0cm |
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内渗透系统 |
甲状腺 |
整体取材,巨细不凌驾2.0cm×2.0cm×0.5cm |
肾上腺 |
整体取材,巨细不凌驾2.0cm×2.0cm×0.5cm |
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循环系统 |
心脏 |
灌注牢靠(若是只做病理),或者剖开牢靠(使用手术刀) |
自动脉 |
自动脉一段1~1.5cm |
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神经系统 |
大脑 |
建议灌注后整体取材,这样牢靠效果更好,未做灌注取材的样本在后期组织很容易散开 |
小脑 |
建议灌注后整体取材,这样牢靠效果更好,未做灌注取材的样本在后期组织很容易散开 |
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脊髓 |
颈、胸和腰髓三段0.5-1.0cm,需使用特定牢靠液举行牢靠 |
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垂体 |
整体取材 |
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免疫系统 |
脾脏 |
取1-2块组织,包括包膜,若是眼观有病变,取病健接壤的位置 |
淋投合 |
一样平常整体取肠系膜淋投合和给药局部淋投合,最大不凌驾2.0cm×2.0cm×0.5cm |
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胸腺 |
可整体取材,取胸腺组织一块并带包膜,或包埋其中一页横切(最大面) |
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生殖系统 |
卵巢 |
整体取材,只管剔除周围脂肪组织,以免牢靠漂浮 |
子宫 |
整体取材或选择横切(环切),最大不凌驾2.0cm×2.0cm×全层 |
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睾丸 |
两侧睾丸整体取材或选择横(纵)切,需使用特定牢靠液举行牢靠 |
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附睾 |
横切附睾头或其他划定偏向 |
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前线腺 |
整体取材,最大不凌驾2.0cm×2.0cm×0.5cm |
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其他组织 |
皮肤 |
纵切(视察皮肤全层)或横切(毛囊横切),要提前备皮,皮肤牢靠不要卷曲,需要平整铺开 |
肿瘤 |
整体取材,若组织过大过厚需要切开牢靠(手术刀),切最大横截面 |
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肌肉 |
优先选取肌束生长偏向显着的位置选择横切或竖切,需特定牢靠液牢靠 |
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眼球 |
整体取材,勿用镊子用力夹取眼球组织, 需使用特定牢靠液举行牢靠 |
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骨组织 |
需充分脱钙,组织变软后方可取材,若只视察骨或枢纽,剔除周围肌肉组织 |
通例病理形态样本生涯及运输要领(以下组织大部分用于做石蜡切片或冰冻切片)
组织类型 |
生涯条件 |
生涯运输条件 |
组织类型 |
生涯条件 |
生涯运输条件 |
通例动物组织 |
10%中性甲醛或4%多聚甲醛牢靠液牢靠 |
常温 |
细胞爬片 |
爬片后4%多聚牢靠0.5h,吸收牢靠液后连忙送检 |
常温 |
眼球 |
眼球牢靠液牢靠 |
常温 |
新鲜组织做冰冻切片 |
液氮速冻后﹣80℃恒久生涯 |
干冰或液氮 |
肌肉 |
肌肉牢靠液牢靠 |
常温 |
牢靠组织做冰冻切片 |
对应的牢靠液,常温 |
常温 |
睾丸 |
睾丸牢靠液牢靠 |
常温 |
脱钙完成的骨组织或钙化组织 |
75%生涯即送 |
常温 |
脊髓 |
脊髓牢靠液牢靠 |
常温 |
冰冻切片 |
-20℃生涯 |
干冰+少量冰袋 |