细胞样本寄送要求
1、冷冻贮存运输(冻存株)
干冰运输冻存细胞。外地寄送时,干冰消耗量约为4-5kg/24h(凭证温度会有所变换),请凭证寄送时长订购足量干冰,用厚实的泡沫箱举行运输。
2、充液法常温运输(T25瓶)
一样平常选择生长优异的细胞,以生长60%~70%为宜,去掉旧作育液,增补新的作育液至瓶颈部,保存微量空气,拧紧瓶盖,并用封口膜密封,放在运送盒内,用棉花等做防震防压处置惩罚。常温,抵达目的地后倒出多余的作育液,只需保存维持生长所需的作育液置37℃作育,越日传代。
提醒:细胞寄送时,需见告细胞名称、作育条件及冻存条件。
细胞流式检测样本收罗要求
1、流式凋亡样本送样要求
【样本网络】
贴壁细胞:
① 取出孔板(皿),小心网络上层清液于对应编号的离心管中留用;
② 用不含EDTA胰酶消化,待细胞质回缩,细胞之间不再毗连成片,则终止消化;
③ 吸出悬液到离心管中(与同编号留用液体混淆),离心网络细胞,加入适量无钙PBS洗涤1次,离心网络细胞沉淀;
④ 在细胞沉淀中加入适量无钙PBS重悬细胞,并将悬液转移至1.5ml尖底EP管中,离心网络细胞沉淀,使用试剂盒自带的binding buffer重悬,4℃运输置实验室(细胞量不低于1×10^5为宜)。
悬浮细胞:
① 取出孔板(皿),网络细胞悬液于对应编号的离心管中留用;
② 离心网络细胞,加入适量无钙PBS洗涤1次,离心网络细胞沉淀;
③ 在细胞沉淀中加入适量无钙PBS重悬细胞,并将悬液转移至1.5ml尖底EP管中;
④ 离心网络细胞沉淀,使用试剂盒自带的binding buffer重悬,4℃运输置实验室(细胞量不低于1×10^5为宜)。
注重事项:
① 使用不含EDTA的胰酶消化网络细胞;
② 用无钙PBS或者binding buffer(1x)重悬于1.5ml尖底EP管中(若是两者均没有,则用作育基重悬,送到本实验室再举行洗涤与染色),4℃运输置实验室。细胞密度不低于1×10^5;
③ 样本运输至实验室后,再行染色,若样品自己带荧光,请提前见告;
④ 公司常备试剂盒为:AnnexinV-APC/PI双染细胞凋亡检测试剂盒(凯基);
⑤ 送样前请至少提前一天预约,并见告相关信息(详细例数、检测内容、特殊要求等)。
2、流式ROS样本送样要求
贴壁细胞:
① 取出孔板(皿),用胰酶消化,待细胞质回缩,细胞之间不再毗连成片,则终止消化;
② 吸出悬液到离心管中,离心网络细胞,加入适量PBS洗涤1次,离心网络细胞沉淀;
③ 在细胞沉淀中加入适量PBS重悬细胞,并将悬液转移至1.5ml尖底EP管中,离心网络细胞沉淀;
④ 使用4℃预冷PBS或者无血清作育基重悬,4℃运输至实验室(细胞量不低于1×10^6为宜)。
悬浮细胞:
① 取出孔板(皿),离心网络细胞,加入适量PBS洗涤1次,离心网络细胞沉淀;
② 在细胞沉淀中加入适量PBS重悬细胞,并将悬液转移至1.5ml尖底EP管中,离心网络细胞沉淀;
③ 使用4℃预冷PBS或者无血清作育基重悬,4℃运输至实验室(细胞量不低于1×10^6为宜)。
注重事项:
① 用PBS重悬于1.5ml尖底EP管中(若是没有,则用无血清作育基重悬,送到本实验室再举行洗涤与染色),4℃运输至实验室。细胞密度不低于1×10^6;
② 样本运输至实验室后,再行染色,若样品自己带荧光,请提前见告;
③ 公司常备试剂盒为:活性氧检测试剂盒(碧云天);
④ 送样前请至少提前一天预约,并见告相关信息(详细例数、检测内容、特殊要求等)。
3、流式周期样本送样要求
贴壁细胞:
① 吸弃上层作育基,PBS洗涤细胞1次,吸弃液体;
② 胰酶消化,待细胞质回缩,细胞之间不再毗连成片,加入新鲜作育基终止消化并网络悬液于对应编号离心管中,离心弃上清;
③ 加入适量PBS洗涤2次,离心网络细胞沉淀;
④ 用75%预冷乙醇重悬细胞,低温运输至实验室(细胞量为1×10^6为宜)。
悬浮细胞:
① 网络细胞悬液于对应编号的离心管中,离心网络细胞沉淀;
② 加入适量PBS洗涤2次,离心网络细胞沉淀;
③ 用75%预冷乙醇重悬细胞,低温运输至实验室(细胞量为1×10^6为宜)。
注重事项:
① 周期细胞量为1×10^6为宜。接纳尖底EP管/离心管,运输样本,可镌汰后期处置惩罚时样本的消耗;
② 牢靠后的细胞,4℃可存放一周左右,-20℃可存放一个月左右。短时间内不检测的话,建议包管冰乙醇的最终浓度为50%左右,阻止样品粘度太高,影响后续实验效果;
③ 外地送样,可在加入75%预冷乙醇牢靠后,低温(泡沫盒+冰袋)邮寄至公司;
④ 送样前请至少提前一天预约,并见告相关信息(详细例数、检测内容、特殊要求等)。
4、流式JC-1样本送样要求
贴壁细胞:
① 取出孔板(皿),用胰酶消化,待细胞质回缩,细胞之间不再毗连成片,则终止消化;
② 吸出悬液到离心管中,离心网络细胞,加入适量PBS洗涤1次,离心网络细胞沉淀;
③ 在细胞沉淀中加入适量无钙PBS重悬细胞,并将悬液转移至1.5ml尖底EP管中,离心网络细胞沉淀;
④ 使用4℃预冷PBS或者无血清作育基重悬,4℃运输至实验室(细胞量不低于1×10^6为宜)。
悬浮细胞:
① 取出孔板(皿),离心网络细胞,加入适量PBS洗涤1次,离心网络细胞沉淀;
② 在细胞沉淀中加入适量PBS重悬细胞,并将悬液转移至1.5ml尖底EP管中,离心网络细胞沉淀;
③ 使用4℃预冷PBS或者无血清作育基重悬,4℃运输至实验室(细胞量不低于1×10^6为宜)。
注重事项:
① 用PBS重悬于1.5ml尖底EP管中(若是没有,则用无血清作育基重悬,送到本实验室再举行洗涤与染色),4℃运输至实验室。细胞密度不低于1×10^6个/ml;
② 样本运输至实验室后,再行染色,若样品自己带荧光,请提前见告;
③ 公司常备试剂盒为:线粒体膜电位检测检测试剂盒(碧云天);
④ 送样前请至少提前一天预约,并见告相关信息(详细例数、检测内容、特殊要求等)。
5、流式组织样本送样
将新鲜组织置于预冷PBS中,4℃运输至实验室。若样品自己带荧光,请提前见告。
6、流式血液样本送样要求
抗凝全血(大大都接纳肝素钠/EDTA抗凝),收罗后室温生涯,只管2h内送达实验室。
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